重组人胰蛋白酶的稳定性研究

《重组人胰蛋白酶的稳定性研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《重组人胰蛋白酶的稳定性研究（4页珍藏版）》请在素问文库上搜索。

1、重组人胰蛋白酶的稳定性研究1.重组人胰蛋白酶反复冻融的稳定性取重组人胰蛋白酶酶液，置于2 0下反复冻融。按常规方法测定每次冻融后的酶活，以未冻融酶液的活力为1 0 0 %，计算酶活残余率。 图1 .重组人胰蛋白酶反复冻融的稳定性2.重组人胰蛋白酶酶液的稳定性蛋白浓度为1 0 mg/ml的重组人胰蛋白酶酶液，配制pH 3 HCl溶液，5 0 mMNaAc-HAc pH 3 .0 , pH 5 .0缓冲液，5 0 mM Tris-HCl pH 7 .6缓冲液，一组不添加CaCl2，另一组添加1 0 mM CaCl2。每周测定各管酶活，以酶液的初始活力为1 0 0 %，计算酶活残余率。7 14 28

2、 35201mM HCl无Ca 2+ 84.73.9 43.81.0 34.01.0 34.60.210mM Ca2+ 11.10.0 0.00.0 0.00.0 0.00.020pH 3 NaAc-HAc无Ca2+ 0.00.0 0.00.0 0.00.0 0.00.010mM Ca2+ 14.61.0 2.30.1 2.70.0 1.80.120pH 5 NaAc-HAc无Ca2+ 116.70.0 113.22.9 103.51.0 111.02.010mM Ca2+ 118.12.9 118.82.9 130.62.0 133.30.020pH 7.6 Tris-HCl无Ca 2+ 9

3、2.42.9 75.02.0 68.81.0 64.61.010mM Ca2+ 116.70.0 113.21.0 127.11.0 113.92.0 时间/days酶活残余率%保存条件 41mM HCl无Ca2+ 50.71.0 43.12.0 35.03.9 35.71.410mM Ca2+ 91.01.0 94.40.0 81.31.0 67.41.04pH 3 NaAc-HAc无Ca2+ 96.51.0 96.52.9 92.41.0 93.81.010mM Ca2+ 98.60.0 97.22.0 90.30.0 94.42.04pH 5 NaAc-HAc无Ca2+ 61.12.0

4、60.41.0 39.61.0 39.40.810mM Ca2+ 93.81.0 92.41.0 65.30.0 59.01.04pH 7.6 Tris-HCl无Ca 2+ 10.60.1 5.60.0 2.70.1 2.30.110mM Ca2+ 90.10.2 83.32.0 63.21.0 54.91.0图2 .重组人胰蛋白酶酶液的稳定性在2 0条件下，比较稳定的是添加了1 0 mM Ca2 +的pH 5 NaAc-HAc缓冲液和pH 7 .6 Tris-HCl缓冲液，酶活不仅没有损失，反而有所提高。在4条件下，比较稳定的是pH 3 NaAc-HAc缓冲液，并且有无Ca2 +存在影响不大

5、，重组人胰蛋白酶在pH 5 .0的缓冲液中比pH 7 .6的缓冲液中要略为稳定些，并且同一pH条件下添加1 0 mM CaCl 2比不添加CaCl2稳定性要好。3.重组人胰蛋白酶冻干保护剂的筛选在蛋白浓度为6 .5 mg/ml（8 0 KU/ml）的重组人胰蛋白酶酶液中，分别添加不同浓度不同种类的保护剂(包括甘露醇，山梨醇，海藻糖，蔗糖，乳糖，牛血清白蛋白，NaCl等)进行冷冻真空干燥，测定各冻干品酶活，计算酶活残余率。 图3 .加入不同冻干保护剂对重组人胰蛋白酶的影响 当酶液中添加1 %甘露醇或1 %海藻糖后，不仅能够使重组hT2有良好的赋形性和溶解性，而且酶活完全没有损失，说明1 %甘露醇

6、或1 %海藻糖能够有效提高重组hT2冻干过程的稳定性，可以作为重组hT2优良的冻干保护剂。4.重组人胰蛋白酶冻干品的稳定性将重组人胰蛋白酶冻干品分别置于2 0，4，2 5下，每隔一周取出一管，各加入0 .5 ml纯水溶解后测定酶的活力，以冻干前的初始酶活为1 0 0 %，计算相对酶活。 图4 .重组人胰蛋白酶在2 0下的稳定性 图5 .重组人胰蛋白酶在4下的稳定性 图6 .重组人胰蛋白酶2 5下的稳定性在同一温度下，添加1 %海藻糖的重组hT2冻干品比添加1 %甘露醇和不添加任何保护剂的酶活都要略高，而添加同一保护剂的冻干粉在-2 0下的酶活又高于4及其它温度。综合以上各温度下不同保护剂的稳定性曲线来看，还是以1 %海藻糖在2 0下密封储存最佳。