检测弓形虫感染孕妇羊水TOX-DNA的临床意义

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1、第 25卷 第 3期2 0 0 4 年 6 月西 安 交 通 大 学 学 报 （ 医 学 版 ）Journal of Xian Jiaotong University（ Medical Sciences）7ol8 25 9o8 3Jun8 2004检 测 弓 形 虫 感 染 孕 妇 羊 水 TOX-DNA 的 临 床 意 义白 桂 芹 ， 岳 亚 飞 ， 李 淑 红 ， 归 巧 娣（ 西 安 交 通 大 学 第 一 医 院 妇 产 科 ， 陕 西 西 安 710061）摘 要 ： 目 的 探 讨 检 测 弓 形 虫 感 染 孕 妇 羊 水 TOX-DNA 的 临 床 意 义 。 方 法 经 E

2、LISA 筛 查 TOX-IgG（ + ） 39 例 ， TOX-IgM（ + ） 13 例 ， 共 52 例 孕 妇 为 研 究 对 象 ， 于 孕 20 36 周 在 B 超 定 位 下 行 经 腹 羊 膜 腔 穿 刺 抽 取 羊 水 ， 并 于 分 娩 或 引 产后 抽 取 新 生 儿 或 引 产 儿 血 ， 用 PCR 技 术 检 测 TOX-DNA 。 结 果 羊 水 TOX-DNA（ + ） 12 例 ， 新 生 儿 或 引 产 儿 血 TOX-DNA（ + ） 12 例 ， 其 中 一 例 羊 水 TOX-DNA（ + ） ， 而 新 生 儿 血 TOX-DNA（ - ） ； 另

3、 一 例 羊 水 TOX-DNA（ - ） ， 而 新 生 儿 血TOX-DNA（ + ） 。 PCR 检 测 羊 水 与 新 生 儿 或 引 产 儿 血 的 符 合 率 为 91.67%（ 11/12） 。 结 论 检 测 弓 形 虫 感 染 孕 妇 的 羊水 TOX-DNA 可 预 测 先 天 性 弓 形 虫 病 。关 键 词 ： 产 前 预 测 ； 弓 形 虫 ； 聚 合 酶 链 反 应中 图 分 类 号 ： R714.53 文 献 标 识 码 ： A 文 章 编 号 ： 1671-8259（ 2004） 03-0312-02收 稿 日 期 ： 2003-06-20 修 回 日 期 ：

4、2003-10-23基 金 项 目 ： 院 基 金 资 助 .作 者 简 介 ： 白 桂 芹 （ 1969-） ， 女 （ 汉 族 ） ， 在 读 博 士 . 弓 形 虫 病 是 全 球 性 人 畜 共 患 疾 病 。 孕 妇 感 染 弓 形 虫 后 ，可 通 过 胎 盘 感 染 胎 儿 ， 是 致 流 产 、 死 胎 、 出 生 缺 陷 的 常 见 原 因 。根 据 流 行 病 学 资 料 ， 我 国 每 年 大 约 出 生 至 少 4. 5 万 名 弓 形 虫缺 陷 儿 1。 目 前 对 弓 形 虫 感 染 孕 妇 胎 儿 宫 内 感 染 的 预 测 研 究较 少 ， 建 立 敏 感 性

5、强 、 特 异 性 高 的 产 前 诊 断 方 法 ， 对 制 定 治 疗计 划 ， 减 少 先 天 性 弓 形 虫 病 患 儿 及 实 现 优 生 优 育 具 有 非 常 重要 的 意 义 。1 对 象 与 方 法1. 1 研 究 对 象 在 西 安 交 通 大 学 第 一 医 院 妇 产 科 行 产 前 检查 ， 并 于 本 院 分 娩 以 ELISA 方 法 两 次 检 测 血 TOX-IgG（ + ） 39例 ， TOX-IgM（ + ） 13 例 共 52 例 无 遗 传 病 史 及 其 他 常 见 引 起 胎儿 发 育 异 常 的 病 毒 感 染 等 孕 妇 为 研 究 对 象 。

6、 孕 期 B 超 检 查 发现 畸 形 儿 或 死 胎 立 即 终 止 妊 娠 ， 对 羊 水 检 测 TOX-DNA（ - ） 者给 予 螺 旋 霉 素 治 疗 以 防 发 生 宫 内 感 染 。 该 52 例 孕 妇 共 分 娩48 例 新 生 儿 及 4 例 引 产 儿 。1. 2 标 本 采 集 52 例 孕 妇 各 采 集 静 脉 血 6 mL， 3 mL 不 抗 凝分 离 血 清 ， 3 mL 加 肝 素 抗 凝 分 离 外 周 血 单 个 核 细 胞 （ PBMC） 。于 孕 20 36 周 在 B 超 定 位 下 行 经 腹 羊 膜 腔 穿 刺 术 ， 抽 取 羊 水10 15

7、 mL（ 混 有 母 血 者 重 新 抽 取 ） ， 立 即 分 离 羊 水 上 清 及 羊 水细 胞 。 分 娩 后 24 h 内 采 集 新 生 儿 或 引 产 儿 静 脉 血 6 mL， 分 离方 法 同 母 血 。1. 3 标 本 检 测 TOX-DNA 检 测 采 用 PCR 技 术 。 PCR 引 物 由中 国 科 学 院 上 海 细 胞 生 物 学 研 究 所 合 成 。 PCR 引 物 1： 5-TT-GCATAGGTTGCAGTCACT-3， PCR 引 物 2： 5-TCTTTA-AAGCGTTCGTGGTC-3 。 免 疫 学 检 测 采 用 ELISA 法 ， 试 剂

8、盒购 自 意 大 利 Sorin 公 司 。 实 验 中 每 组 均 设 有 阳 性 及 空 白 对 照 。1. 4 先 天 性 弓 形 虫 病 的 诊 断 标 准 新 生 儿 或 引 产 儿 血 清TOX-DNA 或 TOX-IgM、 PBMC 中 TOX-DNA 任 意 一 项 阳 性 者 诊断 为 先 天 性 弓 形 虫 病 患 儿 。2 结 果2. 1 PCR 检 测 羊 水 、 新 生 儿 或 引 产 儿 静 脉 血 TOX-DNA 情 况 血 TOX-IgM（ + ） 13 例 ， TOX-IgG（ + ） 39 例 ， 共 52 例 孕 妇 ，PCR 检 测 羊 水 TOX-DN

9、A（ + ） 12 例 。 其 中 1 例 羊 水 TOX-DNA（ + ） ， 而 新 生 儿 TOX-DNA（ - ） ； 另 1 例 羊 水 TOX-DNA（ - ） ，而 新 生 儿 血 TOX-DNA（ + ） 。 PCR 检 测 羊 水 TOX-DNA 预 测 先天 性 弓 形 虫 病 的 敏 感 度 为 91. 67%（ 11/12） ， 特 异 度 为97.50%， 阳 性 预 测 值 为 91.67%， 阴 性 预 测 值 为 97.50%。2. 2 先 天 性 弓 形 虫 病 儿 的 结 局 本 研 究 排 除 了 其 他 常 见 引起 上 述 并 发 症 的 因 素 导

10、致 的 不 良 妊 娠 结 局 。 12 例 先 天 性 弓形 体 病 儿 中 死 胎 2 例 ， 无 脑 儿 1 例 ， 脑 积 水 1 例 ， 新 生 儿 黄 疸 2例 ， 足 月 小 样 儿 1 例 及 5 例 外 观 无 异 常 儿 （ 1 例 过 期 儿 ， 1 例 早产 儿 ， 1 例 新 生 儿 窒 息 ） 。3 讨 论国 内 外 研 究 均 证 实 孕 妇 感 染 弓 形 虫 后 可 导 致 先 天 性 弓 形虫 病 ， 既 往 常 用 胎 儿 附 属 物 的 组 织 培 养 、 动 物 接 种 及 免 疫 学 方法 等 预 测 宫 内 感 染 ， 操 作 复 杂 、 费 时

11、且 敏 感 性 低 。 Grover 于1990 年 采 用 PCR 检 测 10 例 已 经 确 诊 为 先 天 性 弓 形 虫 病 患 儿的 羊 水 ， 结 果 8 例 TOX-DNA（ + ） 2。 Fricker 等 对 羊 水 和 胎 血利 用 PCR 进 行 先 天 性 弓 形 虫 病 产 前 诊 断 进 行 比 较 发 现 ， 羊 水敏 感 性 （ 88.2%） 与 胎 血 （ 87. 5%） 基 本 相 同 ， 羊 水 实 验 特 异 性（ 100%） 高 于 胎 血 （ 86.3%） ， 且 脐 带 穿 刺 有 较 多 的 并 发 症 ， 故在 先 天 性 弓 形 虫 病 的

12、 产 前 诊 断 中 应 选 择 羊 水 穿 刺 而 放 弃 脐 带穿 刺 3 。 本 研 究 结 果 表 明 PCR 检 测 羊 水 TOX-DNA 进 行 宫 内感 染 产 前 预 测 方 法 敏 感 度 为 91.67%， 特 异 度 为 97.50%， 阳 性预 测 值 91.67%， 阴 性 预 测 值 为 97.50%。 在 出 生 后 确 诊 的 12例 先 天 性 弓 形 虫 病 儿 中 ， PCR 检 测 羊 水 TOX-DNA（ + ） 得 到 产前 预 测 11 例 ， 诊 断 准 确 率 为 91.67%（ 11/12） 。 结 果 提 示 采 用PCR 方 法 检 测

13、 羊 水 TOX-DNA 是 预 测 先 天 性 弓 形 虫 病 敏 感 性强 、 特 异 性 高 的 方 法 。 本 研 究 发 现 羊 水 TOX-DNA（ - ） 而 新 生儿 血 TOX-DNA（ + ） 者 1 例 ， 其 妊 娠 结 局 为 足 月 小 样 儿 。 可 能的 原 因 穿 刺 距 感 染 时 间 小 于 6 周 ， 病 原 体 未 传 染 给 胎 儿 或还 没 有 大 量 复 制 ， 胎 儿 病 原 体 负 荷 过 少 尚 未 排 泌 病 原 体 4； PCR 所 采 用 的 标 本 量 少 ， 可 因 取 样 误 差 使 待 检 标 本 不 含 病 原体 ； 标 本

14、 中 有 抑 制 基 因 扩 增 的 物 质 存 在 。孕 妇 弓 形 虫 感 染 可 通 过 胎 盘 感 染 胎 儿 ， 引 起 流 产 、 死 胎 及胎 儿 出 生 缺 陷 等 不 良 后 果 。 即 使 出 生 时 外 观 正 常 的 先 天 性 弓形 虫 病 患 儿 随 年 龄 增 长 ， 其 中 50% 80% 也 表 现 为 后 发 的 神经 系 统 症 状 和 渐 进 性 眼 睛 损 害 。 本 研 究 中 的 12 例 先 天 性 弓形 虫 病 儿 大 部 分 有 不 同 程 度 的 出 生 缺 陷 。Thalhammer 提 出 用 乙 胺 嘧 啶 -磺 胺 对 孕 期 原

15、发 性 弓 形 虫感 染 进 行 治 疗 ， 可 使 先 天 性 弓 形 虫 病 的 发 病 率 减 少 70%。Couvreur 研 究 表 明 孕 期 对 原 发 性 弓 形 虫 感 染 用 螺 旋 霉 素 治 疗可 使 先 天 性 弓 形 虫 病 的 发 病 率 下 降 50% 5， 并 且 孕 期 使 用 安全 。 本 研 究 对 羊 水 TOX-DNA（ - ） 40 例 给 予 螺 旋 霉 素 治 疗 ，只 有 1 例 发 生 了 宫 内 感 染 。 因 此 ， 对 孕 母 血 TOX-DNA（ + ） ，而 羊 水 TOX-DNA（ - ） 者 应 积 极 治 疗 防 止 后 发

16、 的 胎 儿 宫 内感 染 。参 考 文 献 ： 1 崔 君 兆 . 我 国 孕 妇 弓 形 虫 感 染 致 胎 婴 先 天 畸 形 、 缺 陷 研 究 进 展 J . 临 床 儿 科 杂 志 ， 1995， 13（ 4） ： 220 -222. 2 Grover CM， Thulliez P， Remington JS， et al. Rapid prenatal diag-nosis of congenital toxoplasma infection by using polymetase chainreaction J . J Clin Microbiol， 1990， 28： 229

17、7 -2301. 3 Fricker H H， Pelloux H， Muet F， et al. Prenatal diagnosis of con-genital toxoplasmosis： Comparative value of fetal blood and amnioticfluid using serological techniques and cultures J . Prenat Diagn，1997， 17（ 9） ： 831 -835. 4 Nicolini U， Hustermann I， Tassis J， et al. Prenatal diagnosis of

18、congenital human cytomegalovirus infection J . Prenat Diagn，1994， 14（ 10） ： 903 -906. 5 Couvreur J， Thulliez P， Daffos F， et al. Kn utero treatment or toxo-plasmic foetopathy Lith the combination pyrimethamine-sulfadiazine J . Fetal Diagn Ther， 1993， （ 1） ： 45 -50.（ 编 辑 韩 维 栋%）（ 上 接 第 300 页 ）去 掉 TFE

19、 预 脉 冲 参 数 ， 可 提 升 血 管 周 围 稳 定 组织 的 信 号 强 度 ； 并 且 水 脂 位 移 参 数 选 择 最 大 位 移 ， 使主 动 脉 的 信 号 与 周 围 组 织 之 间 有 黑 边 效 应 ， 因 此 它 们之 间 形 成 了 明 确 的 对 比 。 又 因 真 假 两 腔 血 流 速 度 不同 ， 其 信 号 也 不 同 而 形 成 对 比 。 采 集 次 数 取 4 次 ， 即对 收 集 的 信 号 进 行 4 次 叠 加 平 均 处 理 ， 以 提 高 图 像 的信 噪 比 。3. 2 T1W/ TFE 图 像 对 主 动 脉 夹 层 的 表 现 由

20、于T1W/ TFE 序 列 采 用 反 转 恢 复 的 组 织 准 备 预 脉 冲 7，即 在 快 速 梯 度 回 波 序 列 之 前 ， 对 组 织 进 行 准 备 ， 会 出现 组 织 磁 化 矢 量 的 差 别 ， 使 稳 定 的 组 织 饱 和 ， 信 号 降低 。 当 准 备 时 间 结 束 后 ， 再 施 加 小 角 度 射 频 激 发 脉冲 ， 采 集 梯 度 回 波 信 号 。 流 动 的 血 液 因 未 受 到 组 织 准备 预 脉 冲 的 影 响 ， 所 以 血 流 信 号 为 高 信 号 。 20 例 均可 清 晰 显 示 剥 离 的 内 膜 片 及 被 其 分 隔 的

21、真 假 腔 ， 内 膜片 呈 线 状 或 弧 线 状 低 信 号 影 ， 假 腔 多 位 于 主 动 脉 的 外侧 。 3 例 由 于 假 腔 内 血 流 速 度 快 其 信 号 与 真 腔 接 近而 无 法 区 别 ， 应 参 考 SE 序 列 进 行 对 比 鉴 别 。 10 例 显示 了 病 变 的 内 膜 破 口 ， 表 现 为 内 膜 片 线 状 影 局 限 性 断裂 不 连 续 ， 其 中 3 例 见 多 发 破 口 。 有 些 小 的 破 口 不 易显 示 ， 可 能 受 扫 描 方 向 没 有 垂 直 于 内 膜 破 口 的 因 素 影响 2。 8 例 显 示 了 附 壁 血

22、栓 形 成 ， 血 栓 信 号 为 低 信号 。 血 栓 与 慢 血 流 的 次 高 信 号 之 间 形 成 对 比 。 2 例显 示 了 升 主 动 脉 夹 层 并 扩 张 ， 表 现 为 高 信 号 。 由 于T1W/TFE 序 列 亮 血 流 信 号 的 特 点 ， 使 主 动 脉 扩 张 及迂 曲 的 影 像 效 果 很 直 观 。 T1W/ TFE 的 视 觉 效 果 与 电影 GRE 序 列 的 信 号 效 果 及 注 射 造 影 剂 的 效 果 也 很 相似 ， 所 以 ， 一 般 情 况 下 ， 无 需 注 射 造 影 剂 就 能 够 很 好 地显 示 主 动 脉 血 管 壁

23、及 管 腔 形 态 ， 比 自 旋 回 波 更 明 显 。而 且 ， 对 某 些 患 者 可 以 节 省 造 影 剂 费 用 8。综 上 所 述 ， T1W/ TFE 序 列 是 个 成 像 时 间 短 ， 运 动伪 影 小 ， 组 织 对 比 清 晰 ， 视 觉 效 果 佳 的 序 列 ， 对 显 示 主动 脉 夹 层 有 着 良 好 的 效 果 。参 考 文 献 ： 1 沈 东 挥 ， 张 维 升 ， 邹 松 ， 等 . 主 动 脉 夹 层 动 脉 瘤 的 MRK 诊 断 与 评 价 J . 福 建 医 科 大 学 学 报 ， 2001， 35： 83 -85. 2 游 精 航 . 磁 共

24、 振 成 像 对 主 动 脉 夹 层 的 诊 断 价 值 J . 心 血 管 康 复医 学 杂 志 ， 2001， 10（ 2） ： 171 -172. 3 尤 志 军 ， 方 虹 ， 刘 满 生 ， 等 . 主 动 脉 夹 层 动 脉 瘤 的 磁 共 振 成 像 J .第 四 军 医 大 学 学 报 ， 2001， 22（ 2） ： 190 -191. 4 祁 吉 ， 范 占 明 ， 刘 继 生 ， 等 译 . 临 床 磁 共 振 血 管 成 像 M . 第 一 版 .北 京 ： 人 民 卫 生 出 版 社 ， 1998.376 -377. 5 Sommer T， Fehske M， Hol

25、zknecht N， et al. Iortic dissection： acomparative study of diagnosis Lith spiral CT， multiplanartransesophageal echocardiography and MR imaging J . Radiology，1996， 199（ 2） ： 374. 6 郗 农 ， 雷 晓 燕 ， 吴 晓 明 ， 等 . 周 围 门 控 技 术 在 胸 部 血 管 磁 共 振 成 像的 应 用 J . 中 国 医 学 计 算 机 成 像 杂 志 ， 2002， 8（ 5） ： 344 -345. 7 周 康 荣 ， 陈 祖 望 . 体 部 磁 共 振 成 像 M . 第 一 版 . 上 海 ： 上 海 科 技 出版 社 ， 2000.26 -27. 8 白 红 利 ， 朱 培 菊 ， 邓 开 鸿 ， 等 . 主 动 脉 夹 层 的 MRK 诊 断 J . 华 西医 科 大 学 学 报 ， 2001， 32（ 4） ： 616 -617.（ 编 辑 邱 芬 ）